質粒抽提
詳細介紹
Alphabio的質粒小量抽提試劑盒(通用型) (Plasmid Mini Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Miniprep Kit for All Purpose)是一種用于從大腸桿菌中進行小量質??焖俪樘岬耐ㄓ眯碗x心柱式試劑盒。
本試劑盒不僅適用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等,也適用于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等,能有效避免EndA+菌株中高豐度核酸酶的污染,并適用于從糖類修飾水平高的野生菌株中提取質粒。
野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA,如果endA突變失活,其基因型會被標注為endA1,相應的突變菌株被稱為EndA-菌株,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質粒,微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化,導致容易降解,而本試劑盒增加了特殊的洗滌步驟(核酸酶洗滌液溶液PB洗滌),可以有效避免EndA+菌株中抽提獲得的質粒容易降解的問題。
本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足30分鐘即可完成。
每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。每個純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質粒量會受質??截悢档纫蛩赜绊?。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
本試劑盒抽提所得到的質??芍苯佑糜谵D染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,內切酶消化等。本試劑盒在使用溶液PB的情況下,獲得的質粒的純度更高,內毒素含量低,總體上轉染細胞的效率會顯著提高。
保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項:
第一次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4oC存放。
第一次使用前請根據說明書和瓶上的標示,在溶液IV (洗滌液)中加入相應體積的無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
溫度較低時,溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37oC水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會產生大量氣泡。
溶液II使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性,溶液II、溶液III和溶液IV對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本試劑盒不僅適用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等,也適用于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等,能有效避免EndA+菌株中高豐度核酸酶的污染,并適用于從糖類修飾水平高的野生菌株中提取質粒。
野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA,如果endA突變失活,其基因型會被標注為endA1,相應的突變菌株被稱為EndA-菌株,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質粒,微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化,導致容易降解,而本試劑盒增加了特殊的洗滌步驟(核酸酶洗滌液溶液PB洗滌),可以有效避免EndA+菌株中抽提獲得的質粒容易降解的問題。
本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足30分鐘即可完成。
每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。每個純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質粒量會受質??截悢档纫蛩赜绊?。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
本試劑盒抽提所得到的質??芍苯佑糜谵D染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,內切酶消化等。本試劑盒在使用溶液PB的情況下,獲得的質粒的純度更高,內毒素含量低,總體上轉染細胞的效率會顯著提高。
保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項:
第一次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4oC存放。
第一次使用前請根據說明書和瓶上的標示,在溶液IV (洗滌液)中加入相應體積的無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
溫度較低時,溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37oC水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會產生大量氣泡。
溶液II使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性,溶液II、溶液III和溶液IV對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。