一、用于免疫的動物
作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足夠數量的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，為///雄性，此外還需十分注意動物的飼養，以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔，用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。
二、免疫途徑
免疫途徑有多種多樣，如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮內、皮下、淋巴結內注射等，一般常用皮下或背部多點皮內注射，每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，一般不宜采用靜脈注射。
三、佐劑
由于不同個體對同一抗原的反應性不同，而且不同抗原產生免疫反應的能力也有強有弱，因此常常在注射抗原的同時，加入能增強抗原的抗原性物質，以刺激機體產生較強的免疫反應，這種物質稱為免疫佐劑。
佐劑除了延長抗原在體內的存留時間，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激網狀內皮系統，使參與免疫反應的免疫活性細胞增多，促進T細胞與B細胞的相互作用，從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產生。
常用的佐劑是福氏佐劑（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份，羊毛脂與石臘油的比例，視需要可調整為1：2～9（V/V），這是不完全福氏佐劑，在每毫升不完全佐劑加入1～20mg卡介苗就成為完全佐劑。
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存備用。免疫前取等容積完全或不完全佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再繼續研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內完全不擴散為止。為避免損失抗原，亦可用一注射器裝抗原液，另一注射器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管連接，然后二者來回反復抽吸，約數十分鐘后即能完全乳化。檢查合格后即以其中一注射器作注射用。
四、免疫方法
抗原劑量，劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為劑量為1/4左右。每2～3周加強免疫一次。加強免疫時用不完全佐劑，免疫時皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不必注射百日咳疫苗。
在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，檢測抗體效價（見后）。如未達到預期效價，需再進行加強免疫，直到滿意時為止（圖2-3）。當抗體效價達到預期水平時，即可放血制備抗血清。
五、抗血清的采集與保存
家兔是zui常用以產生抗體的動物，因此這里主要討論兔血的收集。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血，鼠等小動物取血可參閱有關資料。取兔血有兩種方法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，一是頸動脈入血，也可心臟采血。取動脈或靜脈放血時，將兔放入一個特造的木匣或籠內，耳露于箱（籠）外，也可由另一人捉住兔身。剪去耳緣的毛，用少許二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術刀片，快速切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可收集30～40ml 。然后用棉球壓迫止血，凝血后洗去二甲苯。二星期后，可在另一耳放血。此法可反復多次放血。頸動脈放血時，將兔仰臥，固定于兔臺，剪去頸部的毛，切開皮膚，暴露頸動脈，插管，放血。放血過程中要嚴格按無菌要求進行。
收集的血液置于室溫下1h左右，凝固后，置4℃下，過夜（切勿冰凍）析出血清，離心，4000rpm，10min。在無菌條件，吸出血清，分裝（0.05～0.2ml），貯于-40℃以下冰箱，或凍干后貯存于4。C冰箱保存。
六、抗血清質量的評價
在免疫期間，不僅各個不同的動物，而且同一動物在不同的時間內抗血清效價、特異性、親合力等都可能發生變化，因而必須經常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親合力等方面作徹底的評價后，才可使用所取得的抗血清。
1、效價
抗血清的效價，就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價測定的方法常用的是放射免疫法，此法對所有的抗體均適用。某些由大分子（如蛋白類）抗原所產生的抗體，可用雙擴散等方法測定。前者測定的效價極為。而后者則粗糙得多。
（1）放射免疫法
以不同稀釋度的抗血清與標記抗原混合，孵育24h后，測定其結合率。通常以結合率為50%的血清稀度和為效價。如某抗血清的結合率為50%時的稀釋度為1：15000，則該血清的效價就是1：15000。抗血清的效價，除由抗血清本身的性質決定外，還受標記抗原的質量、孵育時間，所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響，在工作中必須引起注意。
（2）雙向擴散法
利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴散，兩者在相交處產生沉淀線，以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。
球脂板的制備：100ml pH 7.1 的磷酸鹽
作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足夠數量的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，為///雄性，此外還需十分注意動物的飼養，以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔，用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。
二、免疫途徑
免疫途徑有多種多樣，如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮內、皮下、淋巴結內注射等，一般常用皮下或背部多點皮內注射，每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，一般不宜采用靜脈注射。
三、佐劑
由于不同個體對同一抗原的反應性不同，而且不同抗原產生免疫反應的能力也有強有弱，因此常常在注射抗原的同時，加入能增強抗原的抗原性物質，以刺激機體產生較強的免疫反應，這種物質稱為免疫佐劑。
佐劑除了延長抗原在體內的存留時間，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激網狀內皮系統，使參與免疫反應的免疫活性細胞增多，促進T細胞與B細胞的相互作用，從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產生。
常用的佐劑是福氏佐劑（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份，羊毛脂與石臘油的比例，視需要可調整為1：2～9（V/V），這是不完全福氏佐劑，在每毫升不完全佐劑加入1～20mg卡介苗就成為完全佐劑。
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存備用。免疫前取等容積完全或不完全佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再繼續研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內完全不擴散為止。為避免損失抗原，亦可用一注射器裝抗原液，另一注射器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管連接，然后二者來回反復抽吸，約數十分鐘后即能完全乳化。檢查合格后即以其中一注射器作注射用。
四、免疫方法
抗原劑量，劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為劑量為1/4左右。每2～3周加強免疫一次。加強免疫時用不完全佐劑，免疫時皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不必注射百日咳疫苗。
在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，檢測抗體效價（見后）。如未達到預期效價，需再進行加強免疫，直到滿意時為止（圖2-3）。當抗體效價達到預期水平時，即可放血制備抗血清。
五、抗血清的采集與保存
家兔是zui常用以產生抗體的動物，因此這里主要討論兔血的收集。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血，鼠等小動物取血可參閱有關資料。取兔血有兩種方法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，一是頸動脈入血，也可心臟采血。取動脈或靜脈放血時，將兔放入一個特造的木匣或籠內，耳露于箱（籠）外，也可由另一人捉住兔身。剪去耳緣的毛，用少許二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術刀片，快速切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可收集30～40ml 。然后用棉球壓迫止血，凝血后洗去二甲苯。二星期后，可在另一耳放血。此法可反復多次放血。頸動脈放血時，將兔仰臥，固定于兔臺，剪去頸部的毛，切開皮膚，暴露頸動脈，插管，放血。放血過程中要嚴格按無菌要求進行。
收集的血液置于室溫下1h左右，凝固后，置4℃下，過夜（切勿冰凍）析出血清，離心，4000rpm，10min。在無菌條件，吸出血清，分裝（0.05～0.2ml），貯于-40℃以下冰箱，或凍干后貯存于4。C冰箱保存。
六、抗血清質量的評價
在免疫期間，不僅各個不同的動物，而且同一動物在不同的時間內抗血清效價、特異性、親合力等都可能發生變化，因而必須經常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親合力等方面作徹底的評價后，才可使用所取得的抗血清。
1、效價
抗血清的效價，就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價測定的方法常用的是放射免疫法，此法對所有的抗體均適用。某些由大分子（如蛋白類）抗原所產生的抗體，可用雙擴散等方法測定。前者測定的效價極為。而后者則粗糙得多。
（1）放射免疫法
以不同稀釋度的抗血清與標記抗原混合，孵育24h后，測定其結合率。通常以結合率為50%的血清稀度和為效價。如某抗血清的結合率為50%時的稀釋度為1：15000，則該血清的效價就是1：15000。抗血清的效價，除由抗血清本身的性質決定外，還受標記抗原的質量、孵育時間，所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響，在工作中必須引起注意。
（2）雙向擴散法
利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴散，兩者在相交處產生沉淀線，以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。
球脂板的制備：100ml pH 7.1 的磷酸鹽
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