產品信息

Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羥苯基熒光素   A5235   1mg     -20oC 避光保存

產品描述
氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano 開發的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比 H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優秀的特異性和穩定性。APF 和 HPF 顯示有限的非選擇性反應，和相對較高的光誘導氧化抗性。APF 和 HPF 具細胞膜滲透性，本身無熒光，直到與羥基自由基或過氧亞硝基陰離子反應，還能與次氯酸陰離子反應，產生強綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標板或流式細胞儀檢測。
本品以粉末形式提供，可直接溶于無水 DMF 配制成 5mM 儲存液，常用工作濃度范圍 1-10μM，需根據自身的實驗體系或參考文獻進行優化。
產品特性
1） CAS NO.：359010-69-8
2） 同義名：3'-p-(hydroxyphenyl) fluorescein (HPF) 羥苯基熒光素
保存與運輸方法
保存：-20oC 避光干燥保存，至少 1 年有效。運輸：冰袋運輸。


使用方法
一、 儲存液制備
將低溫保存的 1mg 粉末置于室溫回溫至少 20min，之后加入 471μl 無水 DMF 配置成 5mM 儲存液。充分溶解和混勻后，按照單次用量分裝，-20oC 避光干燥保存，避免反復凍融。
【注】：HPF 能溶于 DMSO（10mM），但有數據顯示 DMSO 是羥基自由基的淬滅劑，會干擾檢測和降低靈敏性。因此，建議用DMF 作為溶劑。
二、 溶液體系檢測
正式實驗前，取一管HPF 儲存液置于室溫回溫，使其充分融解。之后用合適的緩沖液（比如HHBS 緩沖液， PBS 緩沖液）稀釋到所需的工作濃度。建議起始濃度為 1-10μM，需根據自身的實驗體系或參考文獻進行優化。
三、 細胞體系檢測
以下實驗步驟僅做參考，最佳的工作濃度、孵育時間和溫度需根據實際情況進行調整。在加入 HPF 工作液之前按需處理細胞。
1）根據具體用量，將DMF 儲存液用 HHBS 緩沖液或其他生理緩沖液稀釋成 1-10μM 工作液。
2）根據實驗設計處理細胞（比如，RASM 細胞用 50-100nM  血管緊張素II 處理 3-5h）。
3）取步驟 1）準備的 1-10μM 工作液加入細胞，37oC 孵育 20-60min。
4）吸掉染色工作液，用HHBS 或其他生理緩沖液替換。
5）用合適的熒光儀器（Ex/Em=492/515nm）來檢測。
【注 1】：BSA 和酚紅會影響熒光，需謹慎使用。

【注 2】：HPF 和 APF 能用于溶液體系或胞內 ROS 檢測。

注意事項：
1）APF 和 HPF 僅用于科研研究，不可用于體外診斷研究。
2）APF 和HPF 產生的熒光相對于其他活性氧探針比如 DCFH 弱很多，這是探針本身的特性決定的（見附表 1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性）。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。