Alphabio的質粒大量抽提試劑盒(Plasmid Maxi Preparation Kit, Plasmid Maxiprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進行大量質粒快速抽提的離心柱式試劑盒。
本試劑盒適用于常用的EndA-菌株DH5A、JM109和XL-1 blue等。對于EndA+菌株如JM110、BL21 (DE3)、TG1和HB101
等，可以順利完成質粒抽提，但從EndA+菌株中抽提獲得的質粒會有輕微的核酸酶污染，如果在內切酶緩沖液中37℃孵育1小時會導致質粒全部降解。從EndA+菌株中抽提質粒時推薦使用碧云天的D0007S/D0007M 質粒小量抽提試劑盒(通用型)、D0020 質粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質粒大量抽提試劑盒(通用型)。
野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I，能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA，如果endA突變失活，其基因型會被標注為endA1，相應的突變菌株被稱為EndA-菌株，而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質粒，微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化，導致容易降解。
本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，6個樣品只需不足90分鐘即可完成。
每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限大于500微克。每個純化柱可用于抽提100毫升左右用LB培養過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數等因素影響。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
本試劑盒抽提得到的質粒可直接用于轉染細胞，DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等。
保存條件：
室溫保存，一年有效。
注意事項：
第一次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標記。加入RNase A后4℃存放。
第一次使用前在溶液IV (洗滌液)中加入150ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標記。
溫度較低時，溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻，否則會產生大量氣泡。
溶液II使用完后，一定要蓋緊瓶蓋，防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性，溶液II和溶液III對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本試劑盒所有操作均在室溫進行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。