Alphabio的質(zhì)粒大量抽提試劑盒(通用型) (Plasmid Maxi Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Maxiprep Kit for All Purpose)是一種用于從大腸桿菌中進(jìn)行大量質(zhì)粒快速抽提的通用型離心柱式試劑盒。
本試劑盒不僅適用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等，也適用于EndA+菌株如JM110、BL21 (DE3)、TG1和HB101等，能有效避免EndA+菌株中高豐度核酸酶的污染，并適用于從糖類修飾水平高的野生菌株中提取質(zhì)粒。
野生型大腸桿菌中表達(dá)Endonuclease I，能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA，如果endA突變失活，其基因型會被標(biāo)注為endA1，相應(yīng)的突變菌株被稱為EndA-菌株，而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質(zhì)粒，微量核酸酶和質(zhì)粒結(jié)合而容易被共純化，導(dǎo)致容易降解，而本試劑盒增加了特殊的洗滌步驟(核酸酶洗滌液溶液PB洗滌)，可以有效避免EndA+菌株中抽提獲得的質(zhì)粒容易降解的問題。


本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間，結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上，在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫，從而實現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，6個樣品只需不足90分鐘即可完成。
每個質(zhì)粒純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為500微克。每個純化柱可用于抽提約100毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌。抽提所得質(zhì)粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質(zhì)粒量會受質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素影響。抽提獲得的質(zhì)粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
本試劑盒抽提所得到的質(zhì)粒可直接用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞，DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等。本試劑盒在使用溶液PB的情況下，獲得的質(zhì)粒的純度更高，內(nèi)毒素含量低，總體上轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率會顯著提高。
保存條件：
室溫保存，一年有效。
注意事項：
第一次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。加入RNase A后4℃存放。
第一次使用前請根據(jù)說明書和瓶上的標(biāo)示，在每瓶溶液IV (洗滌液)中加入150ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
溫度較低時，溶液II和溶液III可能會有沉淀產(chǎn)生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻，否則會產(chǎn)生大量氣泡。
溶液II使用完后，一定要蓋緊瓶蓋，防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強(qiáng)堿性，溶液II、溶液III、溶液PB和溶液IV對人體都有刺激性，操作時請小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。